方法

优点

缺点

主要应用

普通 PCR

· 经典且最为成熟的方法

· PCR所需试剂等经济

· PCR产物及电泳产物可

继续做其他分子生物学实验

· 准确度低

· 灵敏度低

· 操作繁琐

· 易污染

· 只能定性分析数据

· PCR后需配备电泳

· 容易出现假阳性，

· PCR产物与目的条带大小相似 时难以区分。

· 基因测序

· 分子克隆(例如质粒构建)

· 基因分型

实时荧光 定量PCR

· 技术较为成熟，现已广泛应用。

· 商品化试剂盒很多

· 准确度、灵敏度、特异度进一步提升

· 操作简便

· 可以相对定量分析，可以分析两倍的浓度差别

· 无需PCR后处理

· 检测初始模板浓度范围大

· 依赖于标准曲线定量，误差相对较大

· 起始拷贝数小的模板检测灵敏度低甚至无法检测

· 目的基因突变易导致检测失败

· 受抑制剂影响较大

· 病原体检测

· 病毒的早期分型鉴别

· 病毒相对定量

数字 PCR

· 不依赖于标准曲线误差小

· 实现绝对定量，可以分析微小 浓度差别。

· 对于起始拷贝数低的模板检测 效果好

· 高精密度、高灵敏度、高特异度

· 受抑制剂影响较小

· 由于高精密度的确保， 所以极易污染

· 起始拷贝数不能过高

· 仪器和试剂昂贵

· 技术不如前两者成熟，还有 许多实验出现假阳性有待考证。

· 病毒载荷绝对定量

· 核酸标准品绝对定量

· 细菌活菌计数

· 早期检测罕见基因突变 检查

· 精准分子诊断

· 肿瘤个性化诊断

· 食品安全检测

· 基因表达分析、基因检测、全细胞扩增